Khóa lưỡng phân là kiểu phổ biến nhất trong các khóa phân loại sinh vật.  Nó được gọi là "khóa lưỡng phân" vì mỗi bước trong quá trình xác định đưa ra hai lựa chọn (tùy chọn lưỡng phân), và người dùng lựa chọn một trong hai để tiếp tục quá trình xác định.

Nguyên tắc xây dựng khóa lưỡng phân:

`-` Phân loại đối tượng thành các nhóm nhỏ hơn dựa trên các đặc điểm phân biệt.

`-` Mỗi bước trong khóa đưa ra một câu hỏi hoặc đặc điểm với hai lựa chọn (ví dụ: "có lông" và "không có lông").

`-` Đảm bảo các đặc điểm được sử dụng dễ dàng nhận biết và không gây nhầm lẫn.

`-` Sắp xếp các đặc điểm theo thứ tự logic để người dùng dễ dàng theo dõi. Mỗi lựa chọn cuối cùng nên dẫn đến một danh tính cụ thể hoặc kết luận rõ ràng.